用小鼠模型分析表达牛结核分枝杆菌Ag85B重组腺病毒的细胞免疫特性
[目的]构建表达牛结核分枝杆菌抗原Ag85B重组腺病毒rAd-Ag85B,并用小鼠模型分析其细胞免疫特点.[方法]采用PCR方法,扩增结核分枝杆菌Ag85B的编码基因fbpB,测序后构建pDC516-Ag85B重组质粒.利用脂质体将pDC516-Ag85B与pBHGfrt△AE1,3FLP共转染Ad293细胞包装成重组病毒rAd-Ag85B.空斑纯化后用电镜负染、目的基因转录和蛋白表达进行rAd-Ag85B验证.同时将rAd-Ag85B和rAd(wtAd)分别经皮下注射免疫BALB/c小鼠,二免二周后取小鼠脾脏细胞,进行CD69表面分子表达、淋巴细胞增殖和ELISPOT实验分析.[结果]在电镜下能观察到包装的重组病毒粒子,且在转录和蛋白水平上验证了rAd-Ag85B构建成功.免疫试验结果显示,rAd-Ag85B能激活CD4+T和CD8+T细胞表面分子CD69的表达,并引起淋巴细胞增殖.ELISPOT表明rAd-Ag85B呈现Th1免疫特点.[结论]成功构建的rAd-Ag85B能引起机体针对PPD蛋白或Ag85B多肽的Th1免疫应答.
抗原Ag85B、牛结核分枝杆菌、重组腺病毒、γ干扰素、CD69
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R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
国家重点基础研究发展规划973计划2006CB504404;国家科技重大专项基金2008ZX10003-010;公益性行业科研专项200903027;江苏省科技攻关项目BE2007340
2010-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
811-816
