木酮糖激酶基因整合表达载体构建及在酿酒酵母中的过表达

摘要：

[目的]以载体p406ADH1为构建骨架,构建一个酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)工业菌株的整合表达载体.[方法]通过酶切连接的方式,将4个元件片段:作为筛选标记的G418抗性基因KanR,用于基因表达的ADH1终止子片段,酿酒酵母W5自身木酮糖激酶基因,18S rDNA介导的同源整合区,插入到骨架质粒p406ADH1中,得到多拷贝整合表达载体pCXS-RKTr.将该载体线性转化酿酒酵母后,对转化子中木酮糖激酶酶活进行测定,检测其表达情况.[结果]重组质粒在酿酒酵母体内实现了木酮糖激酶的高水平稳定表达,其酶活力是初始菌株的2.87倍.[结论]本实验构建了一个酿酒酵母工业菌株整合表达载体,并用此载体过表达了其自身的木酮糖激酶基因.该重组质粒载体的构建可以有效解决酿酒酵母中自身木酮糖激酶酶活较低的情况,这为利用木糖高产乙醇酿酒酵母基因工程菌株的构建和其它酵母重组质粒载体的构建奠定基础.

关键词：酿酒酵母、同源整合、载体构建、整合表达、木酮糖激酶

所属期刊栏目：50

分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2007AA100702-6;黑龙江省教育厅重点项目1151z011

在线出版日期：2010-07-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：762-767