猪丹毒丝菌天然SpaA和重组SpaA-N免疫保护效果的评价

摘要：

[目的]本试验以小鼠为动物模型,评估了猪丹毒丝菌重组表面保护性抗原A的N端保护区域(rSpaA-N)和天然SpaA的免疫保护效果.[方法]将猪丹毒丝菌C43311株SpaA-N以可溶形式表达在大肠杆菌BL21中,用GSTBind Resin纯化试剂盒纯化rSpaA-N,采用电洗脱法从猪丹毒丝菌C43311株NaOH提取抗原中纯化天然SpaA,将rSpaA-N、天然SpaA和NaOH提取抗原制成亚单位疫苗,同时设GST及生理盐水对照组,间隔2周分3次皮下免疫小鼠,第3次免疫后2周用100LD_(50)猪丹毒丝菌C43065株进行腹腔攻毒,采用间接EL,ISA方法检测免疫组小鼠血清的抗体动态变化.[结果]SDS-PAGE结果显示,采用GST BindResin纯化试剂盒和电洗脱法纯化得到了66 kDa的rSpaA-N和64 kDa的天然SpaA,蛋白含量分别为1.34 mg/mL和1.26 mg/mL,而Western印迹结果表明rSpaA-N和纯化前后的SpaA具有良好的免疫反应性.保护试验结果表明,不同免疫剂量的rSpaA-N组、天然SpaA组和NaOH提取抗原组均能完全保护小鼠受强毒株C43065的致死性攻击,而GST组和生理盐水组小鼠攻毒后全部死亡.ELISA检测结果表明,在不同免疫剂量的rSpaA-N组、天然spaA组和NaOH提取抗原组小鼠血清中的抗体效价之间无显著差异(P<0.05).[结论]本研究结果表明rSpaA-N具有良好的免疫保护作用,可以作为猪丹毒亚单位疫苗.

关键词：猪丹毒丝菌、rSpaA-N、免疫保护、亚单位疫苗

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分类号：S852(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金30972206;湖南省教育厅资助项目07A055

在线出版日期：2010-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：367-372