黑曲霉(Aspergillus niger)F044脂肪酶新型基因lipB的克隆、表达及酶学性质分析

摘要：

[目的]本研究拟克隆新型的黑曲霉(Aspergillus niger)脂肪酶(EC 3.1.1.3)基因,实现其在大肠杆菌(Eseherichia coli)的高效表达,并对表达产物进行系统的酶学性质分析,为该脂肪酶的工业化生产及应用奠定基础.[方法]通过PCR和RT-PCR克隆脂肪酶基因,并将其开放式阅读框(ORF)克隆入融合表达载体pET28a;表达产物经Ni-agarose纯化后对LipB进行酶学性质分析,并通过圆二色谱进行结构分析.[结果]成功地从A.niger F044中克隆了一个新型的脂肪酶基因lipB,获得了该基因的全基因组序列和eDNA序列(GenBank:FJ536287、FJ536288),并实现了其在E.coli中的高效表达.LipB分子量约为43.O kDa,最适底物为pNPC(C8),酶学动力学常数Km=5.98 mmol/L,最适反应温度为50℃,最适pH为6.0;该酶能在40℃条件下保持稳定,在60℃条件下处理1h后残余酶活仅为18.8%;该酶对Ca2+敏感,当脂肪酶经2 mmol/L Ca2+处理1h后,酶活提高了2.6倍.圆二色谱分析表明,该酶在Ca2+处理前后具有明显的结构变化.[结论]新型A.niger脂肪酶lipB基因的克隆不仅积累了脂肪酶基因资源,而且为高效基因工程菌的构建及规模化应用奠定基础;对LipB的酶学性质分析表明,该酶在食品和油酯化工等领域具有广阔的应用前景.

关键词：黑曲霉、脂肪酶、lipB、克隆、表达

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分类号：Q936(微生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2007AA052417,2006AA020203

在线出版日期：2009-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1095-1101