犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达及特性

摘要：

[目的]利用真核细胞分泌表达犬细小病毒VP2蛋白和研究其特性.[方法]为构建犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)VP2基因的真核分泌型表达载体,首先通过酶切从含有人CD5信号肽序列的质粒中将CD5信号肽基因片段切出,将其连接到真核表达载体pcDNA3.1A的多克隆位点上,构建成pcDNA3.1-CD5sp质粒.然后再通过PCR方法从含有犬细小病毒VP2基因的质粒中扩增VP2基因,并将其插入到pcDNA3.1-CD5sp载体中CD5信号肽的下游,构建成VP2基因的真核分泌型表达载体pcDNA-CD5sp-VP2.经磷酸钙介导转染293T细胞,使其在真核细胞中进行分泌表达,并通过ELISA检测表达的VP2蛋白与犬转铁蛋白受体(TfR)结合的活性.[结果]序列分析结果表明,本实验构建的犬细小病毒VP2基因真核分泌型表达载体结构正确,将该表达载体转染的293T细胞,在培养基中通过Western-blot检测到有VP2重组蛋白的存在.经ELISA检测表明表达的重组VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性.[结论]利用人的CD5信号肽实现了犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达,表达的VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性.

关键词：犬细小病毒、VP2蛋白、293T细胞、分泌性表达、TfR

所属期刊栏目：49

分类号：S852.65;Q786(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金30771586;河北省自然科学基金C2008000244;河北省人事厅留学人员科技活动择优资助项目20080808

在线出版日期：2009-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：648-652