含苏氨酸操纵子重组质粒的构建及其对大肠杆菌L-苏氨酸积累的影响

摘要：

[目的]通过分子生物学手段构建重组质粒,将其转入野生型大肠杆菌W3110,分析含苏氨酸操纵子基因的质粒及质粒定点突变解除反馈抑制时,对L-苏氨酸积累的影响.[方法]以W3110染色体DNA为模板,PCR扩增苏氨酸操纵子基因,即启动子THrLp、编码前导肽基因thrL以及thrA、thrB、thrC基因,通过重叠延伸PCR的方法对thrA基因定点突变,解除苏氨酸对它的反馈抑制,构建出重组表达质粒pWYE112和pWYE134,5 L发酵实验测定L-苏氨酸的产量.[结果]经5 L发酵罐发酵产酸实验,W3110的L-广苏氨酸产量为0.036±0.004 g/L,携带含苏氨酸操纵子质粒的W3110菌株L-广苏氨酸产量为2.590±0.115g/L,质粒上thrA解除反馈抑制后,L-苏氨酸的产量增加到9.223±1.279 g/L.[结论]过表达苏氨酸操纵子基因可以使L-广苏氨酸积累,进一步解除thrA基因的反馈抑制,可以增强L-广苏氨酸积累的效果,为L-苏氨酸工程菌改造的进一步研究奠定了基础.

关键词：L-苏氨酸、重叠延伸PCR、大肠杆菌、发酵、定点突变

所属期刊栏目：49

分类号：Q933;Q935(微生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA022216

在线出版日期：2009-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：591-596