野油菜黄单胞菌8004甘天丝亮特征序列酯酶及其酯酶结构域在大肠杆菌中的表达,包涵体复性及性质

摘要：

[目的]了解野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv. campestris)8004 GDSL(蛋白序列中甘氨酸、天冬氨酸、丝氨酸和亮氨酸特征序列)酯酶的性质.[方法]利用PCR方法扩增Xcc _ est及其不同结构域的基因,这些基因以组氨酸标签融合蛋白的形式在大肠杆菌中获得表达.融合蛋白通过镍亲和色谱纯化.[结果]部分纯化的Xcc _ est在催化对硝基苯丁酸酯时,最适pH值为8.0,最适温度为52℃.Xcc _ est对于对硝基苯丁酸酯的Km值和Vmax值分别是47.6±4.6 μmol/L,和67.6±7.8 U/mg,Xcc _ est的酯酶结构域(Xcc _ estN1-334)对于同一底物的Km值和Vmax值分别是469.4±9.8 μmol/L和2.5±0.9 U/mg.Xcc _ est的成熟结构域(Xcc _ estN26-606)可以获得成功复性,但是成熟酯酶结构域(Xcc _ estN26-334)不能获得复性.复性后的Xcc - estN26-606底物谱较广,在室温下具有较高稳定性.[结论]复性的成熟结构域蛋白(Xcc _ estN26-606)具有一定的生物转化应用前景.

关键词：GDSL酯酶、野油菜黄单胞菌(Xanthomonas、campestris)、复性

所属期刊栏目：49

分类号：Q936(微生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2006AA02Z250;国家重点基础研究发展规划973计划2004CB719606

在线出版日期：2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：191-197