马立克氏病病毒Ⅰ型CVI988/Rispens疫苗株UL13激酶结构域分析及其偏嗜密码子片段在大肠杆菌中的表达

摘要：

[目的]寻找MDV-1UL13激酶催化中心,并体外表达UL13,以便研究UL13蛋白激酶的功能.[方法]用PCR方法从CVI988疫苗株基因组中扩增UL13基因,利用GENEART(www.gcua.de)分析UL13在大肠杆菌中表达时密码子的偏嗜性;通过DNAstar抗原性分析确定UL13的高抗原性片段,进行原核表达,并以切胶免疫方法免疫小鼠制备多抗血清;通过NCBI的protein blast功能及Cn3D 4.1在线软件分析UL13保守结构域.[结果]PCR扩增出UL13基因,序列分析结果表明,UL13的259～400 aa、431～513 aa两个片段抗原性强,且稀有密码子较少;保守结构域分析发现UL13催化中心主要位于152～297氨基酸残基间,且在激酶Subdomain Ⅶ的保守甘氨酸残基被丝氨酸替代,Subdomain Ⅷ的保守非极性脯氨酸残基被极性半胱氨酸残基替换.利用大肠杆菌表达的UL13第259～400 aa片段免疫小鼠制备出多抗血清能与真核表达产物反应.[结论]MDV-1 UL13催化中心主要位于152～297氨基酸残基间,体外表达的基因产物诱导机体产生了抗UL13激酶的特异性抗体.

关键词：MDV-1、CVI988、UL13、序列分析、密码子偏嗜性、表达

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分类号：Q933(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30671569;全国优秀博士学位论文作者专项基金200256;高等学校博士学科点专项科研基金20061117003

在线出版日期：2009-03-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：161-167