在基于BAC的EB病毒基因组中引入突变

摘要：

为了在Epstein-Barr病毒(EBV)172kb的基因组中引入突变以研究基因功能,建立了一种简单有效的基因操作方法.在载体pcDNA3.1(+)上操作,将两端含有重组蛋白FLP识别位点(FRT)的卡那霉素筛选标记基因(kan)与鼻咽癌(NPC)来源的、包含LMP1基因全长ORF的gDNA"无缝"连接(无外源序列插入).连接后的kan-LMP1线性DNA片段经转化、由λ噬菌体中redαβγ系统介导在E.coli中发生同源重组(ET克隆),用kan-LMP1替代了BAC-EBV(p2089)中相应的LMP1基因区域,然后经过重组蛋白FLP对FRT-kan-FRT特异性的识别,切除了引入的kan基因,留下一个69bp的FRT"疤痕".通过抗性筛选和对菌液进行PCR扩增可以鉴定突变子.这种经改进并程序化的方法.也适应于引入其它突变或在其它BAC-疱疹病毒基因组中引入突变.

关键词：EB病毒、突变、同源重组、线性转化

所属期刊栏目：48

分类号：R739.63(肿瘤学)

资助基金：中国博士后科学基金20060390264;湖南省自然科学基金05JJ300064;国家重大科学研究计划2006CB910504

在线出版日期：2008-06-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：385-390