白地霉Y162脂肪酶基因克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

摘要：

借助生物信息学,对已克隆的地霉属脂肪酶全长基因序列进行同源比对,根据保守序列设计引物,在基因组DNA和cDNA水平上,于国内首次克隆了Geotrichum candidum Y162脂肪酶基因.Gcandidum Y162脂肪酶基因全长1692bp,不含内含子,编码包括19个氨基酸信号肽在内的563个氨基酸.与NCBI GenBank中已报道的地霉属脂肪酶氨基酸序列有86%的一致性.将该基因克隆到pPIC9K表达载体上,转化毕赤酵母GS115,摇瓶发酵96h后毕赤酵母分泌表达55 U/mL重组脂肪酶,实现了脂肪酶的高效表达.酶学性质研究表明,该重组脂肪酶对C9位顺式双键的甘油酯具有明显的底物特异性;对甲醇、甘油等有机溶剂呈现耐受性;最适温度和最适pH分别为50℃和8.0,在pH6.0～10.0及60℃以下能保持60%以上的酶活力.底物特异性、有机溶剂、温度及pH耐受性赋予该重组酶良好工业应用潜力.

关键词：白地霉Y162、脂肪酶、基因、克隆、表达

所属期刊栏目：48

分类号：Q786;Q93(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA214061;2006AA020203

在线出版日期：2008-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：184-190