一种具有立体选择性新酯酶的菌种筛选和基因克隆

摘要：

从土样分离到一株产生具有立体选择性酯水解酶的恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida NH33).构建P.putida NH33的基因组文库,并在E.coli中进行酯酶活性筛选,得到一个含有4.7kb插入片段的阳性克隆.对这个克隆的DNA片段进行序列分析,表明它含有一个1142个碱基的开放阅读框,为编码381个氨基酸的酯酶.推测的酯酶氨基酸序列与其它丝氨酸酯水解酶具有共同的保守基序GXSXG.把该蛋白在E.coli BL21(DE3)中进行表达,并用金属亲和层析纯化至单一条带.利用纯化的酶水解2-芳基丙酸乙酯制备2-芳基丙酸的S型异构体,产物的光学纯度eep＞99%,说明此酶可8用于手性药物的合成.该酯酶是一个新酶,其基因序列已递交GenBank,登记号为AY896293.

关键词：酯酶、P. putida NH33、克隆、序列

所属期刊栏目：47

分类号：Q78;Q936(基因工程（遗传工程）)

资助基金：上海医药工业研究院创新资金项目

在线出版日期：2007-07-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：452-455