甾醇C-22去饱和酶高表达对酵母细胞麦角甾醇合成的影响

摘要：

通过PCR扩增克隆到酵母菌甾醇C-22去饱和酶基因 (ERG5) 的编码序列及其终止子序列,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,以磷酸甘油酸激酶基因PGK1 启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pYPE5.以铜离子螯合蛋白基因 CUP1替换ERG5基因内部序列获得ERG5 破坏菌株YSE5,其中麦角甾醇的合成被阻断,而积累了甾醇中间体Ergosta-5,7-dien-3β-ol.表达质粒pYPE5转化破坏菌株后使细胞恢复了合成麦角甾醇的能力.说明表达质粒上的 ERG5基因得到了功能性的表达.将表达质粒pYPE5转化酿酒酵母单倍体菌株YS58,通过营养缺陷互补筛选到重组菌株YS58(pYPE5).对重组菌株、破坏菌株和互补菌株细胞甾醇组分和含量进行测定,发现重组菌株和互补菌株的麦角甾醇和总甾醇含量明显低于对照菌YS58(YEp352).测定不同培养时间细胞的麦角甾醇含量,发现重组菌株的麦角甾醇含量始终低于对照菌YS58(YEp352).可见, ERG5 在酵母中的高表达导致细胞麦角甾醇含量降低.

关键词：酿酒酵母、甾醇C-22去饱和酶基因(ERG5)、高表达、麦角甾醇

所属期刊栏目：47

分类号：Q93(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30470035

在线出版日期：2007-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：274-279