竞争性RT-PCR法及对大肠杆菌acrA基因mRNA表达水平的定量研究

摘要：

建立了用于检测大肠杆菌( Escherichia coli )ATCC25922的 acrA 基因mRNA表达水平的定量竞争性RT-PCR(QC-RT-PCR)体系.PCR合成目标片段的突变型片段(321bp)作为内标准模板(Internal standard,IS),与目标片段一致的片段(389bp)作为目标模板(Target standard,TS),优化两种模板共扩增体系;梯度稀释IS与等量大肠杆菌cDNA样本共扩增,扫描电泳条带,软件分析数据.结果表明,引物设计合适,以IS和TS为模板实现共扩增,产物(321bp和389bp)通过1.5%琼脂糖凝胶电泳有效分离;梯度稀释IS与cDNA共扩增产物出现亮度梯度电泳条带;获得一元回归曲线y=-0.345+0.097x (相关系数 r=0.959,标准差s =0.05997).该研究成功构建内标准模板,优化的共扩增PCR体系实现了对大肠杆菌ATCC25922中 acrA 基因mRNA表达水平的检测,具有简便、高效、敏感度高等优点.

关键词：acrA、定量竞争性RT-PCR、外排系统

所属期刊栏目：47

分类号：R3(基础医学)

资助基金：广东省科技攻关计划2005B32401006;广东省科学院科研基金SF2005005

在线出版日期：2007-04-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：235-239