产单核细胞李斯特菌actA基因在大肠杆菌中的表达及其单克隆抗体的研制

摘要：

利用PCR技术从血清型1/2a的产单核细胞李斯特菌Lm-4株中扩增出actA基因,经克隆筛选和测序鉴定后,构建成该基因的原核表达载体pGEX-6P-1-actA及pET-actA,转入E. coli后,IPTG诱导目的蛋白的表达.SDS-PAGE结果表明,actA基因在两种载体中均获得表达,融合蛋白的大小分别约为120kDa和97kDa.以纯化蛋白为材料进行了ActA单抗的研制,获得4株抗ActA的单克隆抗体杂交瘤细胞株,腹水单抗ELISA效价为1∶5×104～1∶1×105.选取单抗1A5进行Western blot分析,结果表明单抗1A5能和表达产物进行特异性反应,且与Lm-4多抗血清的Western blot结果一致.actA基因的原核表达及单抗的研制为研究ActA蛋白的生物学活性及其致病作用奠定了基础.

关键词：产单核细胞李斯特菌、actA基因、表达、单克隆抗体

所属期刊栏目：46

分类号：Q93(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30425031;国家重点基础研究发展计划973计划2006CB504400;教育部TBAPOYT项目175;扬州大学校科研和教改项目OK0313105

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：999-1002