呋喃丹降解菌CDS-1的双标记菌株的构建

摘要：

用Sau3AI消化呋喃丹降解菌Sphingomonas sp.CDS-1的基因组DNA,将所得DNA片段与BamHⅠ酶切的启动子探针载体pRobe-GFP酶连后转化E.coli DH5α感受态细胞,在选择性平板上培养,从大约1×104个菌落中筛选到50个含启动子片段的阳性克隆.挑选其中一个发光强度最强的阳性克隆F7,将它的重组质粒pF7用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后得到包含sphingomonas sp.CDS-1启动子和gfp基因的DNA片段,将该片段克隆到广宿主载体pPZP201上,得到pPZP201-gfp质粒.将pPZP201-gfp通过三亲接合转移至Sphingomonas sp.CDS-1中得到GFP标记菌株CDS-gfp,经荧光显微镜观察,gfp基因在CDS-gfp中表达量很高.对标记菌株进行连续传代10次(48h/次),发现pPZP201-gfp依然存在,而且发光明显.通过Not Ⅰ酶切位点把linA基因连接到pUT/mini-Tn5上构建新的转座子载体pUT/mini-Tn5-linA.以pRK600为辅助质粒将pUT/mini-Tn5-linA引入到CDS-1中,linA基因通过转座作用,插入到CDS-gfp的染色体中,得到双标记菌株CDS-GFP-LinA.该菌株是一株能同时降解γ-六六六和呋喃丹的基因工程菌,本研究的结果为研究Sphingomonas sp.CDS-1的生态学行为奠定了基础.

关键词：Sphingomonas sp.CDS-1、呋喃丹、降解、双标记、基因工程菌

所属期刊栏目：46

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30400013;江苏省科技厅科研项目BE2002345;BE2003343;BG2005322

在线出版日期：2006-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：613-617