蚓激酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

摘要：

以赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)体内的总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增含自身信号肽的蚓激酶基因F238,将其克隆到pUCm-T载体上,并进行测序.GenBank登录号为:DQ202401.测序结果表明基因全长为738bp,共编码245个氨基酸,包括7个氨基酸的信号肽序列和238个氨基酸的成熟肽序列.与粉正蚓(Lumbricus rubellus)F-Ⅲ-2相比,核苷酸与氨基酸序列的同源性均为99%,仅存在2个碱基的差异,导致2个氨基酸的突变.通过生物信息学方法对蛋白质的理化及结构特性进行分析预测,F238的等电点为4.61,含有11个半胱氨酸,形成3个二硫键.蛋白质分子主要由β折叠组成,具有丝氨酸活性中心,属丝氨酸蛋白酶超家族胰蛋白酶类.以重组质粒pUCm-T-F238为模板,通过PCR方法扩增去信号肽的蚓激酶基因F238-m,构建毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9-F238-m,将其线性化后用电穿孔法导入酵母宿主菌GS115中.在MM和MD平板上筛选表型,经甲醇诱导后,SDS-PAGE分析显示表达产物的分子量为28kDa左右,纤维平板法测定活力最高可达100U/mL.

关键词：赤子爱胜蚓、蚓激酶、克隆、表达、毕赤酵母

所属期刊栏目：46

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：天津市教委资助项目20040805;天津科技大学校科研和教改项目118099

在线出版日期：2006-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：581-585