Sinorhizobium morelens S-5中N-氨甲酰基水解酶基因的克隆、表达和纯化

摘要：

N-氨甲酰基水解酶是一种非常具有工业应用价值的水解酶,可用于制备光学纯氨基酸.通过LA PCR从Sinorhizobium morelens S-5菌中克隆到1.3kb的DNA片段,测序表明该片段上含有一个完整的N-氨甲酰基水解酶的基因(hyuC)序列.将hyuC基因克隆到表达载体pET30a上,重组质粒pET30a-HyuC在大肠杆菌中获得了高水平表达.重组的N-氨甲酰基水解酶经过热处理和三步柱色谱分离而纯化.纯化倍数为16.1倍,收率21.2%.该酶为同源四聚体,亚基分子量是38kDa.最适温度是60℃,最适pH为7.0.该酶有较高的热稳定性和氧化稳定性.Fe2+和Ca2+对酶的活性有一定的促进作用,而金属螯合剂和巯基试剂对酶活无明显影响.

关键词：Sinorhizobium morelen.s、N-氨甲酰基水解酶基因、蛋白纯化、表达

所属期刊栏目：46

分类号：Q78;Q814(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2006-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：565-570