肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定

摘要：

为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因,寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者,应用体内表达技术,以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因galU作为体内报告基因,利用其缺陷体不能合成荚膜多糖,从而不能在宿主体内存活的特点,筛选鉴定肺炎链球菌体内诱导基因.首先,把肺炎链球菌基因组DNA的随机酶切片段(200～500bp)克隆到含有体内、体外双重报告基因(galU-lacZ)的报告载体pEVP3-galU的BglⅡ位点,将获得的质粒库转化肺炎链球菌galU缺陷菌株,得到肺炎链球菌体内启动子诱捕文库,将此文库去感染BALB/c小鼠,经过两轮体内筛选,在涂布有X-gal的TSA血清平板上得到了165个白色菌落,对插入的随机片段进行测序及生物信息学分析,共证实15个不同的体内诱导基因片段,8个为单独的ORF,7个为含有多个ORFs的操纵子结构,它们分别参与细菌在宿主体内的定植与粘附、能量代谢、物质转运、转录调节、DNA复制与重组、细胞壁合成等,另外还包括功能不明的假想蛋白.其中部分ORFs可能与细菌毒力相关,可以作为候选疫苗和药物的靶标.

关键词：肺炎链球菌、体内诱导基因、体内表达技术、荚膜多糖

所属期刊栏目：46

分类号：R378.14(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划30371275;30400376

在线出版日期：2006-08-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：537-541