嗜热酯酶APE1547催化活性的定向进化研究

摘要：

对来源于嗜热古菌Aeropyrum pernix的酯酶(APE1547)催化活性进行定向进化研究.利用APE1547特殊的稳定性,建立了准确的高通量高温酯酶筛选方法.对第一代随机突变库筛选获得了催化活性较野生型提高1.5倍的突变体M010,序列分析表明其氨基酸突变为R526S.从第二代突变库中筛选出的总活力提高5.8倍突变体M020,突变位点为R526S/E88G/A200T/I519L,其比活力与M010一致,但表达量比野生型提高约4倍.对M020酶学 性质表征发现,其最适pH为8.5,比野生型向碱性偏移0.5;活性中心残基酸性基团的解离常数(pK1)由野生型的7.0提高至7.5.晶体结构分析表明,突变位点R526距离活性中心较近,将其突变为Ser降低了活性中心的极性,抑制了催化残基His的解离,使酸性基团的解离常数升高.

关键词：定向进化、嗜热酶、酯酶活力、解离常数

所属期刊栏目：46

分类号：Q93(微生物学)

资助基金：科技部科研项目2004CB719606

在线出版日期：2006-04-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：259-262