亮白曲霉乳糖酶基因在毕赤酵母中的高效分泌表达及酶学性质研究

摘要：

将克隆的亮白曲霉(Aspergillus candidus)乳糖酶基因lacb'插入到毕赤酵母(Pichia pastoris)高效表达载体pPIC9中,与分泌信号肽序列α-因子融合,通过同源重组将lacb'整合到酵母染色体上.通过SDS-PAGE检测和表达产物的酶活性筛选,得到重组转化子,证明乳糖酶获得有效分泌和高效表达.表达的乳糖酶为糖蛋白,表观分子量为130kD,脱糖基后的蛋白分子量下降为110kD.经过5L小罐高密度发酵,重组酵母中酶蛋白表达量为6mg/mL发酵液,每毫升发酵液中乳糖酶的活力为3600U,高于目前国内外报道的水平.进一步研究了表达产物的酶学性质,该酶最适pH为5.2,最适反应温度60℃,比活性为706.5±2.6U/mg,Km为1.7mmol/L,Vmax为3.3μmol/min.与米曲霉ATCC 20423的乳糖酶相比,该乳糖酶具热稳定性强、比活性高、pH范围宽等特点.

关键词：乳糖酶、毕赤酵母、高效表达、酶学性质

所属期刊栏目：45

分类号：Q786;Q55(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2003AA214030

在线出版日期：2005-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：247-252