山梨糖脱氢酶基因在大肠杆菌染色体上整合及表达

摘要：

以质粒pKF3为模板,扩增出两翼与ptsG基因上下游序列同源,中间为氯霉素抗性基因的DNA片段,连至pMD18-T载体,构建得到pMD18-PC.以质粒pQE60-SDH为模板,扩增山梨糖脱氢酶基因sdh,与pMD18-PC连接,得到pMD18-PC-SDH.将其用PvuⅡ酶切,回收含ptsG1-cat-sdh-ptsG2的目的片段,电转化至JM109/pKD46,在Red重组酶的作用下,外源DNA片段与染色体上对应区域发生同源重组,将基因ptsG敲除,替换为cat-sdh基因,获得整合sdh基因的JM109s.经检测JM109s具有山梨糖脱氢酶活性.以ptsG基因上下游序列为引物,JM109s基因组DNA为模板进行PCR,扩增产物测序结果表明sdh基因染色体整合成功.

关键词：山梨糖脱氢酶、Red重组、整合

所属期刊栏目：45

分类号：Q93(微生物学)

在线出版日期：2005-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：139-141