利用不相容质粒共转化大肠杆菌对Cre重组酶体内重组活性的可视检测

摘要：

源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别34bp的靶DNA序列loxP,进行位点特异性的重组反应.为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到具有不同抗性的两种不相容质粒中,然后将构建的原核表达载体pET30a-Cre和pET23b-loxGFP电击共转化大肠杆菌BL21(DE3),利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选.通过直接观察转化子的绿色荧光,便可以显示Cre酶的体内重组活性,并进一步通过SDS-PAGE分析、质粒酶切鉴定进行了验证.结果表明:以gfp为报告基因、通过两种不相容质粒共转化大肠杆菌可以为研究和改进Cre/loxP重组系统提供一种简便直观的检测方法.

关键词：Cre重组酶、共转化、不相容性质粒、绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：45

分类号：Q93(微生物学)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA227031

在线出版日期：2005-03-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：125-128