10.3321/j.issn:0001-6209.2004.04.018
D-乳酸脱氢酶基因克隆及其表达
构建了一株产D,L-乳酸的乳杆菌(Lactobacillus sp. )MD-1的基因文库.利用乳酸脱氢酶和丙酮酸裂解酶缺陷的Escherichia coli FMJ144作为宿主,在厌氧条件下通过互补筛选获得乳酸脱氢酶基因(ldh),非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测证明其阳性克隆表现出D-乳酸脱氢酶(D-LDH)活性.核酸序列分析表明,ldhD的ORF编码331个氨基酸残基组成的蛋白质有两个保守区域,其中V147~D176区是NADH的结合位点,R77~E107区据报道是酶的活性部位.该菌株D-LDH和D羟基异己酸脱氢酶(D-HicDH)属于NADH依赖性脱氢酶家族,ldhD和其他乳杆菌属的ldhD及D-HicDH基因和编码的氨基酸序列相似性较低,核酸序列相似性最高达49.33%,氨基酸序列相同性最高为42%,是一个新的D-乳酸脱氢酶基因.
乳杆菌MD-1、D-乳酸脱氢酶、基因克隆、表达
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Q78(基因工程(遗传工程))
2004-09-02(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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