结合流式细胞仪检测技术的菌体原位PCR扩增

摘要：

建立一套原位PCR检测方法,联合流式细胞仪作为检测工具,作为基因水平转移研究中的基因监控手段.通过常规PCR反应以确定靶基因的基本扩增参数;细菌菌体经过多聚甲醛PBS液固定和溶菌酶处理后进行原位PCR扩增,产物洗涤后迅速用流式细胞仪进行荧光检测,并辅以荧光显微镜镜检.扩增样品在荧光显微镜的蓝光激发下发出明亮的黄绿色荧光,与空白对照中的无扩增菌体的自发荧光可明显区分.流式细胞仪检测结果也显示,阴性菌与阳性菌的荧光强度有明显区别.完成了对目标细菌的原位PCR扩增,并成功地应用流式细胞仪对原位PCR扩增菌体实施了检测.由此表明isPCR-流式细胞仪检测技术在细菌致病基因原位监控上的应用前景.

关键词：原位聚合酶链式反应(isPCR)、流式细胞仪、副溶血弧菌(Vp)、耐热的直接溶血素基因(tdh)

所属期刊栏目：44

分类号：Q78(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30070591

在线出版日期：2004-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：399-401