极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究

摘要：

采用PCR从海栖热袍菌(Thermotoga maritima)克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因,以pET-20b为表达质粒,与其C末端6个组氨酸标签序列融合,在大肠杆菌中得到高效表达.基因表达产物通过热处理和亲和层析柱纯化后,酶纯度达电泳均一.纯化重组酶稳定性检测表明,阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用pH分别为90～95℃和pH 5.0～5.5,在pH 4.2～8.2之间酶活力稳定,95℃的半衰期为4h;SDS-PAGE测得酶的分子量为56.57 kD,与理论推算值相吻合.在所测定的底物中,阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯-阿拉伯呋喃糖苷(pNPAF)有专一性水解作用,其动力学参数Km值为0.18mmol/L, Vmax为139μmol/min*mg.

关键词：阿拉伯糖苷酶、基因表达、重组酶纯化、酶学性质

所属期刊栏目：44

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家"211"工程建设项目

在线出版日期：2004-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：220-225