神经营养素-3基因的人工合成及其在毕赤酵母中的分泌性表达

摘要：

根据人神经营养素-3(Human neurotrohin-3,hNT-3)的基因序列,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichia pastoris)偏爱的形式,设计了10条36～59nt的寡聚核苷酸引物,通过5次连续PCR反应,获得了人工合成的NT-3 cDNA片段(简称NT-3b基因).将合成的NT-3b基因克隆到pPIC9K质粒上,获得重组表达载体pPIC9K-NT-3b.将重组表达载体pPIC9K-NT-3b和pPIC9K-hNT-3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株,经筛选得到重组转化子.不同转化子经甲醇诱导,表达产物进行SDS-PAGE检测、Western blot检测和ELISA分析,结果表明,NT-3b基因和hNT-3基因成功获得分泌性表达,从整体水平上,使用偏爱密码子的NT-3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT-3基因(x2=4.334,P<0.05),表达量在诱导后72～96h最高,达到31mg/L左右.

关键词：神经营养素-3、毕赤酵母、偏爱密码子、基因合成、分泌性表达

所属期刊栏目：44

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：210-214