球孢白僵菌羧基转运蛋白基因BbJEN1及其上游序列的克隆与分析

摘要：

在分析一株球孢白僵菌T-DNA插入突变体T12的Tagging序列的基础上,根据与其具有高度同源性的一条金龟子绿僵菌EST序列(编号为AJ273226)设计简并引物,用YADE法从球孢白僵菌中扩增出该EST的同源序列及其延伸序列.序列分析表明,该片段与粗糙脉孢霉的羧基转运蛋白JEN1具有高度同源性,由此确定该序列为球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1基因的部分序列.然后利用YADE法延伸扩增该序列的上、下游序列,获得球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的全长DNA序列,命名为GBbJEN1.利用3′-RACE扩增出球孢白僵菌羧基转运蛋白JEN1的cDNA序列,命名为BbJEN1.BbJEN1全长1656bp,编码514个氨基酸的蛋白.推测蛋白分子量为55975.37Da,等电点9.32.氨基酸序列与金龟子绿僵菌、粗糙脉孢霉和酿酒酵母羧基转运蛋白JEN1的同源性分别为77%、66%和30%.序列分析表明,GBbJEN1含有2个内含子.Southern杂交表明,GBbJEN1基因在球孢白僵菌基因组中为单拷贝.利用RT-PCR法对BbJEN1的表达特性进行了分析,结果发现BbJEN1基因的转录受蟑螂壳、蝉蜕等昆虫体壁的诱导,受葡萄糖的抑制.进一步利用YADE法获得了长为977bp的GBbJEN1上游序列,其中含有可能的葡萄糖抑制调控序列和压力反应元件.

关键词：球孢白僵菌、羧基转运蛋白

所属期刊栏目：44

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2002AA245021;国家自然科学基金30300235

在线出版日期：2004-07-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：198-201