猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因在昆虫细胞中的高效融合表达

摘要：

对杆状病毒Bac-to-Bac表达系统的转座质粒pFastbac1进行改造,即在其多角体蛋白启动子下游插入谷胱苷肽-S-转移酶(glutathione-S-transferase, GST)基因,构建GST融合表达转座质粒pFGST.通过转座和转染Sf9细胞,证实该系统能高水平表达GST.采用PCR方法从pMT-gp51质粒中扩增截去N端信号肽序列的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)YA株ORF5基因,并将截短的ORF5基因片段克隆到pFGST中,使之与GST融合,构建的重组转座质粒pFGST-53转染DH10Bac,提取大分子Bacmid DNA,转染Sf9细胞,获得能表达融合蛋白的高滴度重组病毒rvGST53.rvGST53感染Sf9细胞,SDS-PAGE和Western印迹分析表明:与GST融合的ORF5基因在Sf9细胞中获得高效表达,表达产物分子量为45kD,能与抗PRRSV E蛋白单克隆抗体发生特异性反应.将表达产物免疫小白鼠,经间接免疫荧光检测,免疫血清能使PRRSV YA株感染的MARC-145细胞呈较强的荧光着色,证实表达的融合蛋白具有良好的免疫原性.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、ORF5基因、GST、融合表达、免疫原性

所属期刊栏目：43

分类号：S850(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家高技术研究发展计划863计划2001AA213051;湖北省武汉市青年科技晨光计划20025001041

在线出版日期：2005-11-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：8-14