瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

摘要：

采用刚果红染色法从瑞氏木霉cDNA文库中分离到一株具有CMCase活性的阳性克隆,测序结果显示该基因所编码的蛋白质为瑞氏木霉内切葡聚糖酶Ⅲ(EGⅢ).对重组酿酒酵母所产生的EGⅢ进行了酶学性质分析,其最适pH为5.0,最适温度为60℃.检测了酿酒酵母蛋白质分泌系统组分SSO2和SEB1对EGⅢ分泌的影响.结果表明,在可过量表达蛋白质分泌系统组分SSO2的酿酒酵母H837中,EGⅢ的分泌量最高.由此分析,酿酒酵母SSO2蛋白可能在EGⅢ的分泌中,是一个限速步骤.通过PCR方法删除EGⅢ基因5＇端非翻译区的98bp核苷酸序列使EGⅢ表达量提高了5.3倍.这提示我们,瑞氏木霉的EGⅢ基因在酿酒酵母细胞中表达时,其mRNA 5＇端先导序列中可能存在影响该基因表达水平的调控序列.

关键词：内切葡聚糖酶Ⅲ、瑞氏木霉、酿酒酵母、基因表达、蛋白质分泌

所属期刊栏目：41

分类号：Q932(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金39970392

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：391-396