松口蘑菌丝体的分离和RAPD-PCR分析

摘要：

针对松口蘑[ Tricholoma matsutake(S. Ito et Imai)Sing. ]菌丝体分离培养困难和各种相关分离物目前难以用出菇试验鉴定的现实,采用8种培养基配方,对9个不同来源的松口蘑子实体的不同部位及菌根、菌土进行组织分离,计接种试管810多支,结果从菌褶部位获得94支慢生型的菌丝体分离菌株,从菌柄部位仅获得1支快生型的菌丝体分离菌株.以马铃薯葡萄糖土壤滤液培养基(PDAS)、马铃薯葡萄糖麦麸滤液培养基(PDAW)、BM培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)对菌褶进行组织分离,获慢生型菌丝体的成功率依次为74.4%、35.5%、15.6%和8.9%.以各分离菌株的来源松口蘑子实体和中日两国松口蘑研究者提供的分离菌株作为DNA参照样品,对从供试子实体、菌根、菌土进行组织分离获得的各种相关纯培养物进行亲菌鉴定.采用筛选的17个随机引物介导25个供试松口蘑子实体及其分离菌体的RAPD(Random Amplified Polymorphic DNA)-PCR反应,全部获得了清晰而稳定的DNA指纹图谱,结果一致表明:每个松口蘑子实体的菌盖(含菌褶)、菌柄与从自身菌褶分离的慢生型纯培养菌丝体都具有相同的DNA指纹图谱,其相似系数为1.000,明确揭示松口蘑个体的DNA同质性,而不同来源的供试松口蘑之间的相似系数在0.934～0.994范围内,所用17个引物很好地揭示了来自我国东北与西南的松口蘑和分布在日本的松口蘑存在明显的总DNA多态性.分析表明:不同松口蘑子实体之间存在总DNA指纹图谱的个体特异性,每株从菌褶部位分离到的慢生型菌丝体与其来源子实体的总DNA指纹图谱相同,故而判断二者存在亲菌关系.供试松口蘑极高的DNA相似性聚类与采集地相对应,支持它们是一个形态学物种下的不同居群.试验没有发现被孢霉(Mortierella sp.)侵入松口蘑子实体的证据,讨论了松口蘑菌丝体分离中常出现的被孢霉、酵母菌与松口蘑的亲缘关系.

关键词：松口蘑、子实体、分离菌株、亲菌鉴定、RAPD-PCR分析

所属期刊栏目：41

分类号：Q949.32(植物学)

资助基金：国家自然科学基金39770025;高等学校博士学科点专项科研项目970403

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：278-286