DNMT3B对人脐带间质干细胞成骨分化能力的影响

摘要：

目的 研究DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)调控人脐带间质干细胞骨生成的作用.方法 利用RNA干扰法获得两株DNMT3B基因低表达的人脐带间质干细胞(Human Umbilical Mesenchymal Stem Cells,hUMSCs).在使用qPCR和免疫组织化学法确定DNMT3B表达缺失后,对hUMSCs进行骨生成定向诱导分化.并利用免疫组织化学法和茜素红染色评价突变型和野生型hUMSCs成骨能力差异.结果 由RNA干扰获得的两株突变型hUMSCs中两株突变型中DNMTI3B表达量分别下降至野生型hUMSCs的12.67 ±0.45％和35.60 ±0.76％(P ＜0.05).而在DNMT3B突变型hUMSCs中间质干细胞标记物CD73和CD90基因mRNA的表达水平也分别下降(P＜0.05).CD73水平分别是野生型细胞的15.83 ±0.44％和16.60±0.37％(P ＜0.05)；CD90的水平分别是野生型细胞的35.23 ±0.30％和58.64±0.71％(P ＜0.05).在骨生成过程中,免疫组化染色后镜下比较显示DNMT3B突变型的细胞表达Osteocalcin较正常细胞低,qPCR结果表明RUNX2,IBSP和ALPL基因的mRNA表达量水平较正常细胞均明显下降(P＜0.01),其中shD3B-1和shD3B-2的RUNX2基因表达水平分别为正常细胞的55.09±0.53％和53.77 ±0.47％(P＜0.01)；IBSP基因表达水平分别为正常细胞的53.21 ±0.81％和41.75±0.44％(P＜0.01)；ALPL基因表达水平分别为正常细胞的15.55±0.10％和17.86±24％(P＜0.01).同时茜素红染色检测也显示其成骨后细胞成骨功能减弱.结论 DNMT3B突变或缺失会导致hUMSCs骨生成能力下降.

关键词：骨生成、间质干细胞、DNA甲基化转移酶3B、DNA甲基化

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分类号：R681.5+3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

资助基金：国家国际科技合作计划资助项目2011DFB30010

在线出版日期：2013-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：103-107