三种方法浓缩慢病毒后绿色荧光蛋白转染效率的比较

摘要：

目的 比较超滤管法、超速离心法及病毒浓缩液法浓缩慢病毒后绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的转染效率.方法 用摇床过夜摇pMD2.G、psPAX2及GFP载体菌种并用试剂盒提取这三种质粒;将pMD2.G、psPAX2及GFP载体质粒与转染试剂按比例混合后转染293T细胞生产病毒;收集病毒上清液并用超滤管法、超速离心法及病毒浓缩液法浓缩慢病毒;将接种的293T细胞分为3组,并向每组接种有293T细胞的培养液中加入2、4、8、16μl三种方法浓缩的病毒浓缩液,48 h后用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测三种方法浓缩慢病毒后转染293T细胞的GFP表达情况.结果 荧光显微镜观察结果显示随着转染量的增加,GFP表达率增加,超滤管法浓缩病毒转染293T细胞后GFP的表达效率最高;流式检测显示病毒浓缩液法组2、4、8、16μl GFP的表达率分别为(2.4±0.1)％、(3.8±0.3)％、(8.2±0.6)％、(12.2±0.3)％;超滤管法组2、4、8、16μl GFP的表达率分别为(5.4±0.3)％、(7.4±0.4)％、(12.7±0.1)％、(17.3±0.6)％;超速离心法组2、4、8、16μl GFP的表达率分别为(0.7±0.1)％、(1.2±0.1)％、(2.1±0.1)％、(0.4±0.2)％.超滤管法组与其他两组比较,P ＜0.05,差异有统计学意义.结论 不同方法浓缩慢病毒后的GFP转染效率不同,三种慢病毒浓缩方法中超滤管法浓缩慢病毒后的GFP转染效率最高.

关键词：质粒、慢病毒、绿色荧光蛋白

所属期刊栏目：30

分类号：R331(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金81500077,81672607

在线出版日期：2019-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：62-66