蓝藻红色荧光蛋白AⅡ1280GAF2在E.coli BL21(DE3)中的表达及其突变体构建

摘要：

采用PCR技术从鱼腥藻(Anabaena sp.)PCC 7120中扩增获得红色荧光蛋白基因aⅡ1280 gaf2,并利用BamH Ⅰ和SalⅠ酶切位点,将该基因插入到pET-30a(+)中,构建表达载体pET-aⅡ1280gaf2.将该表达载体与藻胆色素生物合成质粒pACYC-ho 1-pcyA同时转化到大肠杆菌E.coli BL21 (DE3),表达后获得大肠杆菌色素细胞.结果 显示,该色素细胞在荧光显微镜下具有红色荧光,且在15E/15Z态之间具有可逆光效应.进一步以pET-aⅡ1280 gaf2为模板,通过定点突变技术在aⅡ1280 gaf2基因中引入C53A突变,获得了突变体AⅡ1280 GAF2 (C53A).将AⅡ1280 GAF2 (C53A)与藻胆色素在E.coli BL21 (DE3)中共表达,获得了比野生型红色荧光更强的大肠杆菌色素细胞.研究结果表明,与野生型相比,AⅡ1280 GAF2 (C53A)具有较高的摩尔消光系数和荧光量子产率,红色荧光更强.

关键词：蓝藻光敏色素、荧光蛋白、探针、可逆效应

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分类号：Q943.2;Q949.22(植物学)

资助基金：湖北省教育厅科学技术研究计划重点项目D20151901;生物资源保护与利用湖北省重点实验室开放基金项目PKLHB1707;湖北民族学院大学生科研训练项目201810517226.This work was supported by grants from the Hubei Provincial Science Key FoundationD20151901;Project of Hubei Key Laboratory of Biological Resources Protection and UtilizationPKLHB1707;Project of Student Research Training from Hubei Minzu University201810517226

在线出版日期：2019-06-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：181-187