甘薯非特异性脂质转移蛋白基因克隆与表达分析

摘要：

非特异脂质转移蛋白(nsLTP)是植物界普遍存在的一类涉及多种胁迫反应的可溶性蛋白.为了阐明甘薯中非特异性脂质转移蛋白基因IbLTP1和IbL TP2在盐胁迫反应中的功能,本研究运用PCR技术,对IbLTP1和IbL TP2基因进行了克隆,并通过生物信息学方法分析了序列结构、蛋白质保守结构域和系统进化关系;利用qRT-PCR方法检测了这两个基因在不同组织中的表达模式以及盐胁迫条件下的表达差异;将IbLTP1和IbL TP2基因克隆到大肠杆菌的原核表达载体pET32a中,对重组菌BL21 (pET32a-LTP)的耐盐性进行分析.序列分析表明:IbLTP1和IbL TP2编码区均不含内含子并都具有等位基因.IbL TP1和IbL TP2基因的蛋白质序列分别包括114和94个氨基酸残基并且不含色氨酸残基,蛋白序列N端含有信号肽序列.保守结构域和系统进化分析结果表明:IbLTP1和IbLTP2均含有nsLTP蛋白的保守结构域,IbLTP1属于Type Ⅰ而IbLTP2属于TypeⅡ.实时荧光定量PCR分析表明:IbL TP1在幼叶中表达量最高,根中表达量最低;而IbL TP2在茎中表达量最高,成熟叶中表达量最低.在NaCl胁迫条件下,IbL TP1和IbL TP2表达量在根中基本无变化而在茎和叶中上调.大肠杆菌BL21 (DE3)中异源表达IbLTP1和IbL TP2基因能够提高转基因菌株对NaCl的耐受性.因此,本研究推测IbLTP1和IbL TP2基因可能在甘薯盐胁迫反应中发挥了作用.

关键词：甘薯、非特异性脂质转移蛋白、氯化钠胁迫、基因克隆、基因表达、实时荧光定量PCR

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分类号：Q943.2(植物学)

资助基金：国家科技支持计划项目2007BAD78B03;四川省“十一五”重点科技攻关项目07SG111-003-1.This work was supported by grants from the National Science and Technology Pillar Program of China 2007BAD78B03 and the "Eleventh-Five" Key Project of Sichuan Province,China 07SG111-003-1.

在线出版日期：2016-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：583-592