基于烟草瞬时表达体系对amiRNA沉默效果快速有效的预验证

摘要：

amiRNA (artificial microRNA)作为一种诱导基因发生特异性沉默的技术已在多种植物中应用,但设计出的不同amiRNAs在所转化株系中的沉默效率难以预测,因此对amiRNA载体的沉默效率进行预验证是非常必要的.本实验以丹参(Salvia miltiorrhiza)的1个MYB类转录因子基因SmPAP1的mRNA序列为amiRNA作用对象,并挑选2个经在线软件WMD3(Web MicroRNA Designer)设计的amiRNAs,分别命名为amiRNA1-Sm-PAP1和amiRNA2-SmPAP1,然后通过农杆菌介导将构建的2个amiRNA载体和SmPAP1过表达植物载体在烟草叶片细胞中进行瞬时共表达.结果显示,amiRNA2的表达丰度约是amiRNA1的2倍;amiRNA2对靶标Sm-PAP1的沉默效率约是amiRNA1的2.5倍;SmPAP1在mRNA和蛋白水平上均与相应amiRNA的表达水平呈显著负相关.因此,amiRNA在烟草细胞中的瞬时表达可快速、有效地对不同amiRNA沉默效果进行预验证,从而为后续的植物遗传转化研究提供重要参考.

关键词：人工microRNA、瞬时表达、基因沉默效率

所属期刊栏目：33

分类号：Q943.2(植物学)

资助基金：国家自然科学基金31170281,31270338;陕西省自然科学基金2011K-16-02-01;安康学院高层次人才科研启动基金AYQDZR200926.

在线出版日期：2016-02-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：819-828