突托蜡梅ISSR引物反应条件的优化与筛选

摘要：

为从突托蜡梅(Chimonanthus grammatus)叶片中提取高质量的总DNA,比较了CTAB法、改良的CTAB法、SDS法、高盐低pH值法、SDS-CTAB法、SDS-蛋白酶K法.结果表明:改良的CTAB是提取突托蜡梅基因组DNA的有效方法.以U811(GA)8C为引物,确立了适合突托蜡梅的ISSR反应体系:在20 μL反应体系(50 ng DNA、0.6 μmol/L引物、1.5 mmol/L Mg2+、0.15 mmol/L dNTPs、2.0 U Taq DNA聚合酶)中,反应程序为:94℃预变性5 min、94℃变性1 min、57.2℃退火45 s、72℃延伸2 min,循环40次,最后于72℃延伸5 min.用来自不同居群的7个个体,以100个ISSR引物进行PCR扩增,筛选出了扩增效果较好的10个引物,得到了74个位点,其中39个为多态位点,多态性位点比例为52.7%.

关键词：突托蜡梅、DNA提取、ISSR、引物筛选

所属期刊栏目：26

分类号：Q75(分子遗传学)

资助基金：江西省自然基金资助项目0430014;江西师范大学青年成长基金资助项目1740

在线出版日期：2008-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：245-250