基于染料标记的核酸适配体对氯霉素的比率定量检测

摘要：

利用荧光染料标记的氯霉素(CAP)核酸适配体(PLV)、有机猝灭基团标记且与CAP核酸适配体部分互补的单链DNA(PC)及核酸染料SYBR Green Ⅰ(SG-Ⅰ)构建了一种比率型荧光探针,并利用该探针建立了一种CAP的定量检测新方法.该探针中,PLV的3'端标记荧光染料6-carboxy-x-rhodamine(ROX),PC的5'端标记猝灭基团Black Hole Quencher 2(BHQ-2).当反应体系中没有CAP时,PLV与PC反应形成双链DNA,荧光染料ROX与猝灭基团BHQ-2相互靠近,ROX的荧光被BHQ-2猝灭,其荧光信号很弱.此时,溶液中的核酸染料SG-Ⅰ可与双链DNA结合,导致SG-Ⅰ的荧光信号显著增强.当体系中存在CAP时,CAP与PLV结合形成更稳定的空间结构,使双链DNA不能形成.此时,荧光染料ROX远离猝灭基团BHQ-2,其荧光得到恢复;另外,由于体系中无双链DNA,SG-Ⅰ游离于溶液中,其荧光信号很弱.根据体系中加入CAP后ROX与SG-Ⅰ荧光强度比值(IROX/ISG-Ⅰ)的变化即可实现对CAP的定量检测.在优化条件下,CAP浓度在2×10-10～100X 10-10 mol/L范围内,IROX/ISG-Ⅰ随CAP浓度的增大而增大,其拟合曲线的回归方程为IROX/ISG-Ⅰ=0.072e0055c(R=0.993),方法检出限为8×10-11mol/L.与单色荧光定量检测CAP的方法相比,该方法重复性更好、检出限更低、准确度更高.

关键词：比率型荧光探针、核酸适配体、氯霉素、定量检测

所属期刊栏目：68

分类号：O657(分析化学)

资助基金：国家自然科学基金;生物资源保护与利用湖北省重点实验室开放基金;生物资源保护与利用湖北省重点实验室开放基金;恩施州科技创新项目;恩施州科技创新项目

在线出版日期：2022-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：405-412