外显子拼接法合成真菌灵芝漆酶基因cDNA

摘要：

为真菌漆酶基因cDNA的克隆提供了一种简便快速的新方法.从含有内含子的灵芝漆酶基因出发,采用外显子拼接PCR方法,合成了灵芝漆酶的cDNA.设计了10对引物分别经PCR扩增该基因的10个外显子,引物设计使前一个外显子的下游引物与下一个外显子的上游引物都有一段同源匹配序列,然后通过两两片段混合作为模板PCR扩增得到两两拼接的外显子片段,再将得到的5个片段前两个混合,后3个混合分别作为模板扩增获得拼接好的外显子1～4大片段和外显子5～10大片段,最后将这两个大片段混合作为模板扩增得到拼接好的全长cDNA序列.与常规方法相比,该方法既避免了RNA的操作,又不用摸索酶表达的条件,可以和基因组步行技术结合快速获得真菌漆酶基因的cDNA.

关键词：外显子拼接法、漆酶、基因合成、cDNA

所属期刊栏目：53

分类号：Q939(微生物学)

资助基金：国家自然科学基金30600014

在线出版日期：2008-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：701-705