La蛋白结合位点缺失的HBeAg mRNA在细胞内的稳定性

摘要：

目的 观察乙型肝炎病毒e抗原mRNA(HBeAg mRNA)上La蛋白结合位点的缺失对其细胞内稳定性的影响,从而进一步研究这个位点在乙肝病毒生命周期中的作用.方法 针对HBeAg mRNA上La蛋白结合位点,在HBV DNA水平上利用PCR定点突变技术.构建突变型HBV载体,使其转录出来的HBeAg mRNA缺失La蛋门结合化点,将其命名为pHBV-mLa;应用脂质体将突变型HBV载体瞬时转染HepG2细胞,同时将转染了野生型HBV载体的细胞作为对照组;在各组中,用半定量逆转录PCR(RTPCR)检测HBeAg mRNA,同时酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中HBeAg.结果 酶切鉴定和碱基测序证明,成功构建了La蛋白结合相关位点部分碱基缺失的突变型HBV载体-pHBV-mLa.转染后半定量RT-PCR检测发现,突变后HBeAg mRNA水平明显低于未突变的对照组,ELISA检测发现突变组中HBeAg表达下调.结论 HBV-DNA上引入的突变可以破坏HBeAg mRNA上La蛋白结合位点,影响HBeAg mRNA在细胞内的稳定性.HBeAg mRNA上La蛋白结合位点对乙肝病毒生命周期至关重要.

关键词：乙型肝炎病毒、缺失、La蛋白、稳定性

所属期刊栏目：18

分类号：R512.6(传染病)

资助基金：国家自然科学基金30872237

在线出版日期：2011-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：926-929