基因表达谱芯片筛选NS5ATP2剪切体NS5ATP2-512转染细胞差异表达基因

摘要：

目的应用基因芯片技术检测丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)反式激活基因NS5ATP2剪切体512的表达对肝母细胞瘤细胞HepG2基因表达谱的影响,进一步阐明NS5ATP2剪切体512蛋白可能的分子生物学功能.方法设计并合成NS5ATP2基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NS5ATP2蛋白编码基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的NS5ATP2编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列的测定,在此过程中发现其剪切体NS5ATP2-512并构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP2-512.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空白表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析.结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误.提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行DNA芯片技术分析.在1 152个基因表达谱的筛选中,发现有14个基因表达水平显著上调,15个基因表达水平显著下调.结论应用基因表达谱芯片技术成功筛选了NS5ATP2剪切体NS5ATP2-512转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明NS5ATP2-512蛋白可能的生物学功能提供依据.

关键词：丙型肝炎病毒、剪切体、基因芯片

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分类号：R373.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金C03011402,C30070689

在线出版日期：2005-10-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：331-335