乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP3的克隆化研究

摘要：

目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术筛选乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)反式激活基因,克隆HBxAg反式激活相关靶基因.方法以HBxAg表达质粒pcDNA3.1(-)-X转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与PGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析,发现其中之一为未知基因片段,与GenBank中注册的已知功能基因序列没有同源性.通过序列同源性搜索比对,电子拼接成功,根据基因起始密码子的Kozak规则和终止密码子下游保守的多聚腺苷信号序列,初步确定新型基因序列.从转染了pcDNA3.1(-)-X的HepG2细胞提取总RNA,以RT-PCR技术扩增获得该新基因的全长序列,并测序加以证实.结果发现的新基因命名为XTP3,在GenBank中注册,注册号为AF490252.XTP3基因的编码序列全长为1020个核苷酸(nt),编码产物由340个氨基酸残基(aa)组成.结论应用抑制性消减杂交技术成功筛选与克隆HBxAg反式激活新型靶基因XTP3,为进一步阐明HBxAg反式调节作用及其在HBV感染中的分子生物学机制提供理论依据和研究方法.

关键词：乙型肝炎病毒、X蛋白、反式激活、基因克隆化

所属期刊栏目：12

分类号：R511(传染病)

资助基金：军队杰出人才基金98H038;国家自然科学基金C030114020,C30070689;军队科技攻关项目98D063;军队科技攻关青年基金01Q138;军队科技攻关项目01B135

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：229-232