Pseudomonas putida GM6多聚磷酸盐激酶(ppk)基因的克隆及表达

摘要：

以一株高效聚磷菌Pseudomonas putida GM6为研究材料.为获得其多聚磷酸盐激酶(polyphosphate kinase,ppk)基因,并验证该基因在磷酸盐转运系统中的作用,根据已报道的ppk基因保守区域设计引物,从其总DNA中成功扩增到ppk基因的部分片段(约528 bp).随后采用快速染色体步移方法(Self-formed adaptor PCR,SEFA-PCR)技术扩增片段的上下游基因序列,将三个序列拼接,用OMIGA软件分析其ORFs,推测ppk基因全长为2 220 bp(GenBank accession number DQ133537).构建的多聚磷酸盐激酶表达菌株E. coli BL21(DE3)/ pET29a-ppk经IPTG诱导后3 h时,明显出现分子量约为81 kDa的表达产物.且表达菌株在12 h时的磷去除率高达80%(对照菌株的磷去除率仅为18%),远高于已报道的40%的去除率.这表明ppk基因在E. coli中的过量表达,导致了E. coli菌体中poly-P的大量聚集,从而大大去除了培养基中的磷酸盐.

关键词：多聚磷酸盐激酶、ppk全基因及上下游序列、快速染色体步移方法(SEFA-PCR)

所属期刊栏目：44

分类号：S154.39(土壤学)

资助基金：江苏省环境保护局科研项目2004007;江苏省社会发展基金BS2003028

在线出版日期：2007-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：727-733