没食子酸脱羧酶的分离与纯化

摘要：

本实验研究了没食子酸脱羧酶(Gallic acid decarboxylase,GAD)的提取、分离、分析及结构表征.建立了考马斯亮蓝法(Y=4.8748X-0.0255,R2=0.9922)和双缩脲法(Y=0.2476X+ 0.0003,R2=0.9993)测定GAD蛋白含量的线性方程.对GAD粗酶液,先采用pH为6,60％/70％的(NH4)2SO4盐沉淀32 h;然后,利用35 kD透析膜处理料液12 ～16 h;再将透析液经二乙氨基乙基(Diethyl Aminoethanol,DEAE)纤维素树脂,在pH为6.5时饱和吸附量可达2.838 mg/g,采用0.4 mol/L NaCl溶液进行洗脱的洗脱液经过G-100葡聚糖凝胶纯化.采用SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳分离得到蛋白样品条带,MALDI-TOF-MS进行结构表征,得到的蛋白分子质量45.62kD,等电点5.19,与已知蛋白质gi/334732950匹配度为53,说明两者具有相似性,但匹配到的序列组仅占蛋白全序列的3％,初步推测GAD可能是一种新的酶.

关键词：没食子酸脱羧酶、微生物降解、焦性没食子酸、结构表征

所属期刊栏目：28

分类号：Q814.1(生物工程学(生物技术))

资助基金：国家863项目2014AA021802;国际合作项目中俄项目2014DFR31300

在线出版日期：2016-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1109-1115,1059