大鼠听泡原代成骨细胞分离培养及鉴定

摘要：

目的 对 SD大鼠听泡的原代成骨细胞进行分离培养及鉴定.方法 选取 6 只出生 24h 的 SD 乳鼠,从颞区无菌分离出听泡组织,经0.25%胰蛋白酶和 I 型胶原酶消化后接种培养;待生长融合至 80%密度时,进行传代培养,于倒置显微镜下观察原代及传代成骨细胞的生长状态,并用 EDU法分析其增殖趋势.对生长良好的细胞进行成骨诱导分化,并用 ALP试剂盒和茜素红试剂盒进行染色分析,鉴定分化效果.结果 大鼠听泡原代及传代成骨细胞培养中,细胞均贴壁良好、生长旺盛,第 2d分别可融合生长至 50%、30%的密度,第 4 d 分别可融合生长至 80%、70%的密度,形态呈现多样化.EDU法检测分析见:第 1～4d细胞增殖比均维持在较高水平,从第 5 d起呈直线下降趋势.经诱导分化后,细胞生长状态良好,形态依旧多样化,早期以梭形为主,中后期形态较为丰腴.分化后 2 周,ALP染色见大量细胞胞质呈现深蓝色;第 15d 经茜素红染色便可见局部出现橙红色钙化结节.结论 通过胰酶联合胶原酶两步消化法,成功地从 SD乳鼠听泡中分离出原代成骨细胞,所得细胞生长及传代能力强,经诱导分化后具备良好的成骨活性,为鼓室硬化等疾病的体外研究提供可能.

关键词：大鼠、听泡、成骨细胞、鼓室硬化

所属期刊栏目：31

分类号：R764(耳鼻咽喉科学)

资助基金：武汉市科技局知识创新专项曙光计划;武汉市卫健委青年项目;武汉市卫健委面上项目;武汉市卫健委面上项目

在线出版日期：2023-09-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：439-443