PAX3基因重组真核细胞表达质粒的构建、表达及意义

摘要：

目的：通过构建PAX3基因及其突变体表达质粒初步研究其外源性表达和定位表达，为研究Waar-denburg综合征（Waardenburg syndrome ，WS）发病机制提供实验基础。方法通过分子克隆技术双酶切pECE -PAX3和pcDNA3．0-HA后连接构建PAX3基因重组真核细胞表达质粒pcDNA3．0-PAX3-HA ，以其为模板分别构建PAX3基因新发突变H80D和H186fs表达质粒pcDNA3．0-H80D-HA和pcDNA3．0-H186fs-HA ， DNA测序鉴定。将PAX3、H80D和H186fs表达质粒分别瞬时转染小鼠胚胎成纤维细胞（NIH3T3细胞），采用Western blot和细胞免疫荧光法分别检测和观察野生PAX3蛋白和突变 H80D、H186fs蛋白在NIH3T3细胞中的表达和分布。结果 PAX3及其突变体 H80D和H186fs表达质粒经DNA测序鉴定序列正确，三者在NIH3T3细胞中正确表达，H80D与PAX3仅在细胞核中分布，H186fs在细胞质与细胞核中均有分布。结论本研究成功构建了PAX3基因及其突变体真核细胞表达质粒，突变对PAX3蛋白的亚细胞定位产生影响，为在体外实验进一步研究国人PAX3基因突变致WS发病的分子机制奠定了实验基础。

关键词：Waardengurg综合征、PAX3、基因突变、体外实验

分类号：R764.43(耳鼻咽喉科学)

资助基金：国家自然科学基金81260160，81170923

在线出版日期：2014-02-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：67-72