Ⅱ型胶原酶体外分离并培养成年小鼠血管纹边缘细胞

摘要：

目的 探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外分离并培养成年小鼠耳蜗血管纹边缘细胞( marginal cell,MC)的方法.方法 选取6只出生75±3d的健康C57BL/6J小鼠,显微分离其耳蜗血管纹组织,以Ⅱ型胶原酶原代消化培养边缘细胞.倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)法测细胞生长曲线,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫荧光法检测上皮细胞标志物——中间丝角蛋白18(CK18)和耳蜗血管纹的独特标志物KCNQ1的表达,RT-PCR法检测CK18和KCNQlmRNA的表达.结果 接种24～48 h后可见细胞贴壁增殖,形成大小不等的细胞岛,一周后细胞迅速生长,相互融合,紧密莲接,形成单层极性上皮层,呈典型的“铺路石”样外观.透射电镜观察可见多角形细胞表面有较多微绒毛,胞浆内线粒体、内质网等细胞器丰富.免疫荧光检测显示CK18和KCNQ1蛋白表达阳性,RT- PCR结果示CK18和KCNQ1mRNA均有表达.结论 采用原代消化培养技术可成功建立成年小鼠耳蜗血管纹MC的体外原代培养,为进一步研究成年期MC的功能和某些内耳疾病的发病机制提供了实验基础.

关键词：成年小鼠、边缘细胞、酶消化法、细胞培养

所属期刊栏目：19

分类号：R339.16(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30672307

在线出版日期：2011-12-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：451-454