阳离子脂质体介导NT-3基因转染豚鼠耳蜗的实验研究

摘要：

目的探讨阳离子脂质体介导的NT-3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能的影响.方法克隆人NT-3 cDNA基因,构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组质粒pIRES2-EGFP-NT3.采用脂质体介导的方法,将重组质粒转染豚鼠耳蜗,分别于术后1天、2周、4周观察转染基因在耳蜗及脑干等部位的表达和分布情况.同时进行耳声发射及ABR测试,了解基因转染对豚鼠耳蜗听功能的影响.结果成功克隆人NT-3 cDNA基因并构建重组质粒pIRES2-EGFP-NT3.重组质粒转染豚鼠耳蜗后,荧光显微镜下观察发现耳蜗螺旋神经节、神经纤维、Corti器、血管纹等均可见绿色荧光,但4周时荧光蛋白的表达强度较1天时明显减弱.而CY3标记的NT-3免疫荧光染色结果基本与EGFP的表达情况一致.此外,对侧耳蜗及第四脑室脉络膜处亦可见较强的绿色荧光.耳蜗基底膜铺片见内外毛细胞结构完整.转染前后豚鼠耳声发射及ABR阈值均无明显改变.结论阳离子脂质体介导的NT-3基因转染对豚鼠耳蜗形态及功能无明显影响;外源性NT-3能够在较长时间内持续表达.

关键词：神经营养素-3、基因克隆、真核表达载体、脂质体、耳蜗

所属期刊栏目：12

分类号：R764.5(耳鼻咽喉科学)

在线出版日期：2004-06-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：182-184,203