小鼠小肠类器官炎症模型的构建

摘要：

目的 建立体外小肠类器官培养体系,探讨脂多糖(LPS)对小肠类器官生长和炎性因子分泌的影响.方法 体外无菌分离并收集C57BL/6小鼠小肠隐窝细胞团,使用类器官基质胶进行包埋,并在完全培养基的支撑下,培养形成具有小肠上皮样结构的立体多叶结构的小肠类器官.小肠类器官培养5～7 d或类器官中央区域变黑时传代,传代后3d将小肠类器官随机分为不同质量浓度LPS组(0、150、175、200、225、250、275、300 mg/L).在LPS诱导24h和48h后观察小肠类器官生长和形态特征变化;用CCK-8法检测不同时间和质量浓度LPS对小肠类器官诱导炎症后增殖活力的影响;采用酶联免疫吸附试验检测4种不同质量浓度LPS(0、175、200、225 mg/L)在不同时间对类器官培养上清液中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素(IL)-1α、IL-6、IL-10水平的影响.结果 初步构建了小鼠小肠类器官培养体系.不同时间和质量浓度LPS作用小肠类器官诱导炎症后,通过形态学观察到小肠类器官会有不同程度的膨胀和内腔凋亡现象的发生,受损的肠上皮中隐窝或肠干细胞的增殖分化和出芽数量也受到不同程度的抑制.小肠类器官在175～225 mg/L的LPS诱导24h和48h后,其增殖活力呈现不同程度的降低(P＜0.05),但细胞活力仍大于50%.200 mg/L和225 mg/L的LPS诱导24h和48h后,IL-1α、IL-6和GM-CSF水平部分升高(P＜0.05);200 mg/L的LPS诱导24h和48h后,IL-10水平降低(P＜0.05).结论 本研究初步构建了不同质量浓度和时间的LPS诱导小肠类器官体外肠道炎症损伤模型,为今后肠道疾病的机制研究和有效药物的筛选提供了更为可靠的研究平台.

关键词：小肠、类器官、脂多糖类、生物因子、隐窝

所属期刊栏目：52

分类号：R574.5(消化系及腹部疾病)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;江西省中医药科技计划重点项目;江西省中医药中青年骨干人才第四批培养计划项目

在线出版日期：2024-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：16-21