PM2.5通过TLR4破坏自噬流加重Raw264.7巨噬细胞炎症反应

摘要：

目的 探讨PM2.5对Raw264.7巨噬细胞自噬及炎症反应的影响及机制.方法 CCK-8检测PM2.5对Raw264.7巨噬细胞活性的影响,透射电镜观察自噬结构;Ad-mCherry-GFP-LC3B转染细胞后荧光显微镜观察自噬通量,以探讨PM2.5对巨噬细胞活性和自噬流的影响.再设置对照组、PM2.5组、雷帕霉素(Rap,自噬诱导剂)组、羟氯喹(HCQ,自噬抑制剂)组、PM2.5+HCQ组、PM2.5+TAK-242[Toll样受体4(TLR4)抑制剂]组.Western blot法检测自噬相关蛋白,包括微管相关轻链蛋白3比值(LC3Ⅱ/Ⅰ)、p62、组织蛋白酶B(CTSB)、溶酶体膜蛋白2(LAMP2)和炎症相关蛋白,包括Toll样受体4(TLR4)、核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)的表达水平;酶联免疫吸附试验检测相关炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18、IL-10分泌水平.结果 Raw264.7巨噬细胞活性随着PM2.5浓度的增加和作用时间的延长而降低.透射电镜观察到PM2.5组有较多自噬空泡和双膜自噬体,自噬溶酶体少见,且荧光显微镜下PM2.5组绿色荧光淬灭不明显,Merge后黄红色荧光比值高于对照组和Rap组(P<0.05).相较于对照组,PM2.5组NLRP3、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、CTSB、IL-1β、IL-18的表达上调,LAMP2、IL-10表达下调(P<0.05),而HCQ抑制自噬的同时,促进NLRP3、IL-1β、IL-18的表达,抑制IL-10表达(P<0.05).相较于对照组、PM2.5组和HCQ组,PM2.5+HCQ组NLRP3、IL-1β、IL-18的上调及IL-10下调更为显著(P<0.05).此外,PM2.5组TLR4表达高于对照组,TAK-242抑制TLR4后NLRP3、LC3Ⅱ/Ⅰ、p62、CTSB、IL-1β、IL-18的表达较PM2.5组下调,LAMP2和IL-10的表达上调(P<0.05).结论 PM2.5可呈时间和浓度依赖性地降低巨噬细胞活性;且PM2.5诱导Raw264.7巨噬细胞发生自噬,但阻断自噬流,加重巨噬细胞炎症反应,且该过程可能由TLR4介导.

关键词：颗粒物、自噬、炎症、Toll样受体4、NLR家族、热蛋白结构域包含蛋白3、动脉粥样硬化、PM2.5

所属期刊栏目：50

分类号：R364.5(病理学)

在线出版日期：2022-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1139-1145