lncRNA IGF2-AS调控IGF2对骨髓间充质干细胞心肌样分化的影响

摘要：

目的 探讨长链非编码RNA胰岛素样生长因子2反义转录物(lncRNA IGF2-AS)调控胰岛素样生长因子2(IGF2)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)心肌样分化的影响.方法 分离培养SD大鼠的BMSCs,倒置显微镜观察原代细胞、第3代细胞的形态;流式细胞仪检测BMSCs表面抗原CD29、CD90、CD45的表达.将第3代生长良好的BMSCs分为对照组、空载体组(转染pLVX-IRES-Zs Green1载体)、lncRNA IGF2-AS组(转染pLVX-IRES-Zs Green1-IGF2-AS)、5-氮杂胞嘧啶(5-AZA)组(8μmol/L 5-AZA处理)、si-NC组、si-IGF2-AS组、si-IGF2组、lncRNA IGF2-AS+si-NC组及lncRNA IGF2-AS+si-IGF2组.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IGF2-AS表达;MTT法检测细胞活力;Western blot检测IGF2、间隙连接蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)蛋白表达;RNA下拉和RNA免疫沉淀(RIP)检测IGF2-AS与IGF2蛋白结合情况.结果 原代细胞在培养初期呈悬浮状态,大多数呈圆形,培养48 h后开始贴壁生长;第3代细胞呈长梭形,排列不整齐,相邻细胞间紧密连接,呈成纤维细胞样.第3代BMSCs高表达CD29(98.21％)、CD90(92.54％),低表达CD45(3.67％).过表达IGF2-AS或5-AZA处理均可促进BMSCs中Cx43、cTnT、cTnI蛋白表达,并降低细胞活力,且5-AZA组相应指标明显低于lncRNA IGF2-AS组(P<0.05).沉默IGF2-AS或抑制IGF2表达均可降低BMSCs中Cx43、cTnT、cTnI蛋白表达,并降低细胞活力(P<0.05);lncRNA IGF2-AS可靶向上调IGF2蛋白的表达(P<0.05);沉默IGF2逆转了过表达IGF2-AS对BMSCs心肌样分化的促进作用.结论 过表达IGF2-AS通过上调IGF2促进BMSCs心肌样分化.

关键词：RNA、长链非编码、RNA、小分子干扰、胰岛素样生长因子Ⅱ、间充质基质细胞、肌细胞、心脏、细胞分化

所属期刊栏目：50

分类号：R349.5(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金81770296

在线出版日期：2022-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：350-356